如何檢測(cè)人工栽培中藥材的農(nóng)藥殘留
來(lái)源： http://www.yoshikomatsuura.com/ 類(lèi)別：實(shí)用技術(shù) 更新時(shí)間：2013-01-29 閱讀次
【本資訊由中國(guó)糧油儀器網(wǎng)提供】 近年來(lái)，隨著中藥材的需求量擴(kuò)大，天然的中藥材已不能滿(mǎn)足市場(chǎng)供給需求，目前大部分中藥材依賴(lài)人工栽培。為提高種植中藥材產(chǎn)量，藥農(nóng)按照種植農(nóng)作物的方法頻繁使用農(nóng)藥。為此，世界衛(wèi)生組織曾在制定植物藥的一般檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)提出農(nóng)藥殘留量測(cè)定的問(wèn)題。目前，農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和薄層色譜法及農(nóng)藥殘留速測(cè)儀法等。農(nóng)藥殘留中的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥分子量較小，易氣化，適合于氣相色譜測(cè)定。本研究采用乙腈為提取溶劑，樣品濃縮干燥后經(jīng)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱提純，丙酮定容，通過(guò)DB－7毛細(xì)管柱和FPD檢測(cè)器進(jìn)行氣相色譜定性和定量。樣品預(yù)處理步驟簡(jiǎn)單，具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度，適合在基層單位推廣使用。
將裝有農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂(lè)果、樂(lè)果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開(kāi)，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過(guò)二號(hào)篩，取約5.0g(準(zhǔn)確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過(guò)無(wú)水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預(yù)淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過(guò)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，液面到達(dá)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進(jìn)行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮?dú)猓兌取?9.999%；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；FPD檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進(jìn)樣量為1.0μL。有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作準(zhǔn)確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測(cè)定使用液。取1.0μL各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行氣相色譜測(cè)定，以不同有機(jī)磷農(nóng)藥出峰的保留時(shí)間定性，峰面積定量。以每種有機(jī)磷農(nóng)藥的不同濃度所對(duì)應(yīng)的峰面積繪制10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
根據(jù)10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖各組分的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。將5個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)系列的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別上機(jī)分析，以各有機(jī)磷農(nóng)藥的峰面積對(duì)濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以3倍信噪比計(jì)算各農(nóng)藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計(jì)算各農(nóng)藥的定量限(LOQ)。線(xiàn)性方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機(jī)磷殘留物的檢測(cè)限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測(cè)要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對(duì)已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥殘留加標(biāo)回收測(cè)定，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液添加量為0.5mg/kg，平行測(cè)定6次，樣品加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)。10種有機(jī)磷農(nóng)藥加標(biāo)回收率在67.1%～120.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＜6.0%，該檢測(cè)方法符合多種農(nóng)藥殘留量的要求。
農(nóng)藥殘留的提取是農(nóng)藥殘留檢測(cè)中很關(guān)鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強(qiáng)并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數(shù)農(nóng)藥，且過(guò)濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來(lái)困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質(zhì)，提取機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對(duì)后續(xù)的凈化分析帶來(lái)的影響，被美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC法)所采用，也是我國(guó)目前常用的提取溶劑，適合有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的提取，且操作簡(jiǎn)單，在有機(jī)磷農(nóng)殘測(cè)定中是首選提取溶劑。
針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥測(cè)定特點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取”。在有機(jī)磷農(nóng)藥樣品凈化的過(guò)程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類(lèi)成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對(duì)植物脂肪無(wú)法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開(kāi)使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質(zhì)，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機(jī)磷農(nóng)殘測(cè)定的樣品凈化中作為首選方法。
將裝有農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂(lè)果、樂(lè)果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開(kāi)，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過(guò)二號(hào)篩，取約5.0g(準(zhǔn)確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過(guò)無(wú)水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預(yù)淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過(guò)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，液面到達(dá)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進(jìn)行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮?dú)猓兌取?9.999%；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；FPD檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進(jìn)樣量為1.0μL。有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作準(zhǔn)確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機(jī)磷類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測(cè)定使用液。取1.0μL各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行氣相色譜測(cè)定，以不同有機(jī)磷農(nóng)藥出峰的保留時(shí)間定性，峰面積定量。以每種有機(jī)磷農(nóng)藥的不同濃度所對(duì)應(yīng)的峰面積繪制10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
根據(jù)10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖各組分的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。10種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。將5個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)系列的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別上機(jī)分析，以各有機(jī)磷農(nóng)藥的峰面積對(duì)濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，以3倍信噪比計(jì)算各農(nóng)藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計(jì)算各農(nóng)藥的定量限(LOQ)。線(xiàn)性方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機(jī)磷殘留物的檢測(cè)限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測(cè)要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對(duì)已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥殘留加標(biāo)回收測(cè)定，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液添加量為0.5mg/kg，平行測(cè)定6次，樣品加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)。10種有機(jī)磷農(nóng)藥加標(biāo)回收率在67.1%～120.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＜6.0%，該檢測(cè)方法符合多種農(nóng)藥殘留量的要求。
農(nóng)藥殘留的提取是農(nóng)藥殘留檢測(cè)中很關(guān)鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強(qiáng)并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數(shù)農(nóng)藥，且過(guò)濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來(lái)困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質(zhì)，提取機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對(duì)后續(xù)的凈化分析帶來(lái)的影響，被美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC法)所采用，也是我國(guó)目前常用的提取溶劑，適合有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的提取，且操作簡(jiǎn)單，在有機(jī)磷農(nóng)殘測(cè)定中是首選提取溶劑。
針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥測(cè)定特點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取”。在有機(jī)磷農(nóng)藥樣品凈化的過(guò)程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類(lèi)成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對(duì)植物脂肪無(wú)法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開(kāi)使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質(zhì)，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機(jī)磷農(nóng)殘測(cè)定的樣品凈化中作為首選方法。
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